Dentysta Kraków
Stomatologia i dentystyka w Krakowie

Izolacja nowego koronawirusa od człowieka z zapaleniem płuc w Arabii Saudyjskiej AD 3

Posted in Uncategorized  by admin
September 1st, 2019

W dniu 11 po przyjęciu (24 czerwca 2012 r.) Pacjent zmarł z powodu postępującej niewydolności oddechowej i nerek. Badanie pośmiertne nie zostało wykonane. Metody
Okazy kliniczne i kultura wirusowa
Próbki krwi zebrano w vacutainer zi bez EDTA. Próbki plwociny zbierano w sterylnych kubkach, po czym dodano pożywkę do transportu wirusów; próbki mieszano i odwirowywano przy 2000 rpm przez 10 minut. Supernatant przeniesiono do nowej jałowej probówki i użyto do inokulacji komórek Vero i LLC-MK2 przez adsorpcję przez godzinę w temperaturze pokojowej, po czym dodano 2% płodową surowicę bydlęcą w minimalnym ośrodku podstawowym Eagle. Kolby inkubowano w inkubatorze z dwutlenkiem węgla w temperaturze 37 ° C i obserwowano codziennie przez 15 dni w przypadku zmian cytopatycznych przy zmianie pożywki co 3 dni.
Diagnostyka wirusowa
Komórki nabłonka oddechowego z plwociny przemyto trzy razy w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS), ponownie zawieszono w ml PBS i nakrapiano na szkiełkach pokrytych teflonem. Szkiełka pozostawiono do wyschnięcia na powietrzu i następnie utrwalano przez 10 minut w schłodzonym acetonie. Szkiełka badano za pomocą immunofluorescencji pośredniej dla wirusa grypy A, wirusa grypy typu B, wirusów paragrypy typu do 3, adenowirusa i wirusa syncytialnego oddechowego przy użyciu zestawu do badania przesiewowego i identyfikacji identyfikacyjnego Bartelsa, jak opisano przez producenta (Trinity Biotech) . Tę samą procedurę zastosowano do wykrywania wirusowych antygenów w inokulowanych komórkach po zaobserwowaniu efektów cytopatycznych. W tym celu komórki zdrapano z kolb do hodowli tkankowej, a komórki z pożywką przeniesiono do sterylnej probówki do wirowania i przygotowano jak opisano dla komórek nabłonka oddechowego z plwociny. Supernatant z plwociny, jak również z eksperymentalnie zaszczepionych hodowli komórkowych, które wykazywały działanie cytopatyczne (i niezainfekowane hodowle jako kontrole negatywne) ekstrahowano przy użyciu zestawu o wysokim czystym wirusowym kwasie nukleinowym, jak opisano przez producenta (Roche). Ekstrakty kwasów nukleinowych testowano za pomocą testu odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej polimerazy (RT-PCR) zaprojektowanego do wykrywania wszystkich znanych paramyksowirusów, 6,7 koronawirusów, 3,8 i enterowirusów9 oraz w czasie rzeczywistym w reakcji PCR na adenowirusy.
Sekwencjonowanie wirusowych genomów
Aby przeprowadzić sekwencję fragmentów PCR PCR pan-koronawirusa, 3 amplikony oczyszczono z żelu i sekwencjonowano przy użyciu zestawu do sekwencjonowania cykli BigDye Terminator v3.1 (Applied Biosystems) i 3130XL Genetic Analyzer (Applied Biosystems), zgodnie z instrukcje producenta. Aby dodatkowo scharakteryzować genom wirusa, wykorzystaliśmy podejście głębokiego sekwencjonowania z amplifikacją losową. Supernatant usunięto z resztek komórkowych przez wirowanie z małą prędkością, a wirus przefiltrowano przez wirówkę 0,45 .m (Millipore) w celu zminimalizowania tła bakteryjnego
[przypisy: galeria gemini tarnów, onkolmed, keratyna hydrolizowana apteka ]

Tags: , ,

No Responses to “Izolacja nowego koronawirusa od człowieka z zapaleniem płuc w Arabii Saudyjskiej AD 3”

  1. Chuckles Says:

    [..] Cytowany fragment: ortopedia[...]

  2. Mr. Peppermint Says:

    Bo lubię owoce… Jeść

  3. Squatch Says:

    [..] Blog oznaczyl uzycie nastepujacego fragmentu Przekształcanie spółek[...]

  4. Leon Says:

    bóle podbrzusza i z boku koło biodra to glisda

  5. Disco Potato Says:

    [..] Cytowany fragment: lekarskie wizyty domowe[...]

  6. Keystone Says:

    U mnie pojawił się nie jeden włókniak

Powiązane tematy z artykułem: galeria gemini tarnów keratyna hydrolizowana apteka onkolmed